尊龙凯时的乙型肝炎病毒(HBV) rcDNA探针法荧光定量PCR试剂盒，依据探针法荧光定量PCR技术原理精心研发，具有多个显著优势：

产品特点

1. 即开即用：用户只需提供样品DNA模板，无需额外准备。
2. 高灵敏度：经过优化的引物和其他组分，确保检测效果。
3. 阳性对照：随附阳性对照，便于识别假阴性样品。
4. 高特异性：引物针对HBV DNA序列的高度保守区域设计，避免与其他生物样本DNA交叉反应。
5. 定性与定量兼用：该试剂盒不仅适用于定性检测，还可用于定量检测，线性范围至少覆盖5个数量级。
6. 充足的实验次数：产品量足以支持50次20μL体系的探针法荧光定量PCR反应。
7. 仅供科研使用。

实验步骤

一、DNA提取

应用自选方法提取和纯化样品DNA，本试剂盒与市面上大多数核酸提取试剂盒兼容。

二、稀释标准曲线样品

为确保操作准确，稀释阳性对照时应在独立区域进行，步骤如下：

1. 标记6个离心管，编号为7至2。
2. 在每个管中分别加入45μL DEPC-H2O。
3. 在7号管中加入5μL阳性对照（浓度为1×10E8拷贝/μL），摇匀，得到标准曲线样品浓度为1×10E7拷贝/μL。
4. 依次将5μL的阳性对照稀释至6号、5号等管，直到形成6个不同浓度的标准曲线样品。

如无须标准曲线，则可直接将阳性对照稀释至1×10E5拷贝/μL。

三、试剂配制

根据待检样品数量，准备相应数量的qPCR管，并加入必要的反应成分。详细配制说明可申请索取。

四、添加模板

向各qPCR管中加入2μL模板，添加顺序为阴性对照（DEPC-H2O）、待测样品模板及阳性对照，随后离心30秒，直接进行扩增反应。

五、扩增反应

将PCR管放置于PCR扩增仪器的适当位置，进行扩增，扩增程序详见使用说明书。

六、结果分析

1. 若制作标准曲线，以阳性对照浓度的log值为横轴，Ct值为纵轴绘制标准曲线，再根据待测样品的Ct值推算DNA浓度的log值。
2. 若未制作标准曲线，依据如下标准判定结果：
- 阳性对照：Ct值<30，显示明显的指数增长并呈S型曲线。
- 阴性对照：Ct值38或无Ct值，未见明显指数增长期和平台期。
- 样本检测结果：Ct值<35，显著指数增长，样本中检测出HBV，结果为阳性；Ct值38或无Ct值，样本中未检测出HBV，结果为阴性；Ct值在35-38范围内需复检；如结果仍在此范围且有明显增长，将判定为阳性，否则为阴性。

运输及保存

本产品应低温运输，储存于-20℃，有效期为一年。阳性对照需单独存放，以防污染其他试剂。