尊龙凯时提供的本试剂盒仅用于科学研究,严禁用于医学诊断。该试剂盒采用双抗体一步夹心法酶联免疫吸附实验(ELISA)的技术原理。实验步骤如下:
操作步骤
首先,在预先包被了adropin(AD)抗体的微孔板中,依次加入样本、标准品和HRP标记的检测抗体,进行温育并彻底洗涤。随后,使用底物TMB显色;在过氧化物酶的催化下,TMB会转化为蓝色,随后在酸性环境中变为最终的黄色。颜色深浅与样本中adropin(AD)的含量呈正相关。
测定过程
使用酶标仪在450nm波长下测定吸光度(OD值),以计算样品浓度。以下是试剂盒的组成:
试剂盒组成
- 96孔配置:微孔酶标板12孔×8条,无标准品03mL*6管,无样本稀释液6mL,无检测抗体-HRP10mL,20×洗涤缓冲液25mL,底物A6mL,底物B6mL,终止液6mL,封板膜2张,说明书1份,自封袋1个。
- 48孔配置:微孔酶标板12孔×4条,标准品与样本稀释液相同,且试剂量相应调整。
样品收集与处理
为确保实验结果的准确性,请遵循以下方法采集与处理样本:
- 血清:使用无热原和内毒素的试管,避免细胞刺激,收集血液后3000转离心10分钟,迅速分离血清与红血球。
- 血浆:使用EDTA、柠檬酸盐或肝素抗凝,3000转离心30分钟取上清。
- 细胞上清液:同样进行3000转离心10分钟以去除颗粒及聚合物。
- 组织匀浆:将组织物料与生理盐水混合后捣碎,随后3000转离心10分钟取上清。
- 保存:若未及时检测样本,请按一次用量分装,冷冻保存于-20℃,避免反复冻融,解冻后需确保样本充分均匀。
自备物品
- 酶标仪(450nm)
- 高精度加样器及枪头:05-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL
操作注意事项
- 从冷藏状态取出试剂盒后,应在室温下平衡15-30分钟再使用。未用完的酶标板应密封保存。
- 洗涤液可能结晶,稀释时可以加热水以帮助溶解,且不会影响结果。
- 所有加样步骤均需使用加样器,保持器具准确性,以减少误差。
- 建议同步测定标准曲线,并做复孔,样本浓度高的需适当稀释再测定。
- 封板膜只能使用一次以防交叉污染。
- 严格按照说明书进行操作,以酶标仪的读数为准。
- 底物需避光保存,所有废弃物需按感染处理。
- 不同批号的试剂成分不得混用。
温馨提示: 尊龙凯时提供代测服务,凡购买本公司Elisa试剂盒均可享受免费的Elisa代测服务,详情请咨询销售经理或在线客服。