尊龙凯时开发的检测试剂盒基于探针法荧光定量PCR原理，具有诸多特点：

产品特点

1. 即开即用：用户只需提供样品DNA模板，操作简便。

2. 高灵敏度：引物及其他组分经过优化处理，灵敏度显著提升。

3. 阳性对照：提供阳性对照，有助于有效识别假阴性样品。

4. 高特异性：引物设计基于中间普雷沃菌DNA序列的高度保守区域，避免与其他生物样本发生交叉反应。

5. 多功能检测：既可进行定性检测，也支持定量检测，定量检测时线性范围可达到至少5个数量级。

6. 足够的反应次数：本产品支持50次20μL体系的探针法荧光定量PCR反应。

7. 科研专用：本产品仅限于科研用途。

使用方法

一、样本制备

通过自选方法提取纯化的样品DNA，本试剂盒与大部分市场上的核酸提取试剂盒兼容。

二、标准曲线的稀释准备

（因阳性对照浓度较高，请在独立区域进行以下稀释操作，以避免交叉污染）

1. 标记6个离心管，编号为7、6、5、4、3、2。

2. 向每管加入45μL DEPC-H2O，建议使用带芯枪头。

3. 在7号管中加入5μL的阳性对照（1×10E8拷贝/μL），震荡均匀，得到1×10E7拷贝/μL的标准样品，放在冰上待用。

4. 换枪头，将6号管中加入5μL来自于7号管的阳性对照，震荡均匀，得1×10E6拷贝/μL的标准样品，放冰上待用。

5. 继续用类似方法依次稀释，直至生成6个不同浓度的标准曲线样品。若不需制作标准曲线，可以直接将阳性对照稀释到1×10E5拷贝/μL。

三、试剂配制与模板添加

根据待检测样品数量，准备N+2个qPCR管，并在每管中添加相应的试剂（详细说明请咨询尊龙凯时）。向qPCR管中加入2μL模板，按照阴性对照（DEPC-H2O）、待测样品、阳性对照的顺序加样，最后离心30秒，立即进行扩增反应。

四、扩增反应

将PCR管放入扩增仪器样品槽，执行下列扩增程序（具体步骤请向尊龙凯时索取）。

结果分析

1. 若制作标准曲线，以阳性对照浓度的log值为横轴，Ct值为纵轴绘制标准曲线。根据待测样品的Ct值推算样品DNA浓度的log值及浓度。

2. 若未制作标准曲线，依据以下标准判定结果：阳性对照Ct值<30，表现出明显的S型曲线；阴性对照Ct值≥38或无Ct值，无明显指数增长；样本检测结果若Ct值<35，则显示检测到婴儿利什曼虫，为阳性；若Ct值≥38或无Ct值，样本中未发现婴儿利什曼虫，为阴性；对于Ct值在35-38范围内的样本，需复检，依旧在该范围且有明显指数增长则判为阳性，否则为阴性。

运输及保存

产品需低温运输，保存条件为-20℃，保存期限为一年。阳性对照需单独存放，避免污染其他试剂。