尊龙凯时研发的荧光定量PCR检测试剂盒，基于探针法原理，具备以下显著特点：

产品特性

1. 即开即用：用户只需提供样品DNA模板，无需繁琐步骤。

2. 高灵敏度：优化后的引物等组分确保检测灵敏度显著提升。

3. 阳性对照：配备阳性对照，便于清晰区分假阴性样品。

4. 高特异性：引物设计选取中间普雷沃菌DNA序列的高度保守区，避免与其他生物样本DNA产生交叉反应。

5. 多功能检测：既可用于定性检测，也可用于定量检测，定量时线性范围至少可达5个数量级。

6. 足量准备：产品可支持50次20μL体系的探针法荧光定量PCR反应。

7. 科研专用：本产品仅限于科研用途。

操作步骤

一、DNA提取（样本制备区）

用户可根据自选方法提取和纯化样品DNA，且本试剂盒与市场上大多数核酸提取试剂盒兼容。

二、稀释标准曲线样品（样本制备区）

为避免污染阳性对照，建议在独立区域进行以下稀释操作：

1. 标记六个离心管，分别为7、6、5、4、3、2。
2. 用带芯枪头添加45μL DEPC-H2O至每个管中（下同）。
3. 在7号管中加入5μL浓度为1×10⁸拷贝/μL的阳性对照，震荡均匀后，该管得1×10⁷拷贝/μL标准样品，放冰待用。
4. 更换枪头，在6号管中加入5μL来自于7号管的样品，震荡后获得1×10⁶拷贝/μL的标准样品，放冰待用。
5. 依次类推，完成5号至2号管稀释，以此获得6个不同稀释度的标准样品。若无需标准曲线，可直接将阳性对照稀释至1×10⁵拷贝/μL。

三、试剂配制（试剂准备区）

根据待检样品数量N，准备N+2个qPCR管（N个待检样品+1个阴性对照+6个阳性对照），向各PCR管中添加必要成分（详细说明书可向尊龙凯时索取），完成后转移至样本准备区。

四、添加模板（模板添加区）

在每个qPCR管中加入2μL模板，添加顺序为阴性对照（DEPC-H2O）、待测样品模板及婴儿利什曼虫qPCR阳性对照，离心30秒后立即进行扩增反应。

五、扩增反应（扩增及产物分析区）

将PCR管放入PCR扩增仪器进行扩增，具体扩增程序请参阅详细说明书。

六、结果分析

1. 如果制作标准曲线，使用阳性对照浓度的log值为横轴，Ct值为纵轴绘制标准曲线，进而推算待测样品的DNA浓度log值。

2. 若不制作标准曲线，依据以下标准判断结果：

• 阳性对照：Ct值<30，出现明显指数增长，S型曲线特征。
• 阴性对照：Ct值38或无Ct值，无显著增长期。
• 样本检测结果：Ct值<35, 表明检测到婴儿利什曼虫，结果为阳性；Ct值38或无Ct值，表明未检测到，结果阴性；Ct值在35-38之间则需复检，并依重复结果判断阳性或阴性。

运输及保存

本产品需低温运输，保存于-20℃，保存期限为一年。阳性对照需单独存放，避免污染其他试剂。