**产品及特点**

尊龙凯时推出的检测试剂盒，基于探针法荧光定量PCR原理开发，具备以下几大特点：

1. **即开即用**：用户只需提供样品DNA模板，无需额外准备。

2. **高灵敏度**：经过优化的引物和其他组分，确保检测的灵敏度显著提升。

3. **阳性对照**：提供阳性对照样品，便于用户有效区分假阴性结果。

4. **特异性高**：引物设计基于中间普雷沃菌DNA序列的高度保守区域，能够有效避免与其他生物样本DNA的交叉反应。

5. **兼具定性和定量检测**：此试剂盒不仅可进行定性检测，还支持定量检测，线性范围至少达到5个数量级。

6. **使用量充足**：可以支持50次20μL体系的探针法荧光定量PCR反应。

7. **科研用途**：本产品限于科研使用。

**方法**

一、DNA提取（样本制备区）

用户可自行选择适合的DNA提取方法，本试剂盒与市场上大多数核酸提取试剂盒兼容。

二、稀释标准曲线样品（样本制备区）

为了避免样品及试剂盒其他成分的污染，稀释操作应在独立区域进行：

1. 标记6个离心管，分别编号为7、6、5、4、3、2。
2. 在每个管中加入45μL DEPC-H2O，建议使用带芯枪头。
3. 在7号管加入5μL 1×10⁸ 拷贝/μL的阳性对照，充分震荡1分钟，生成1×10⁷ 拷贝/μL的标准品，放冰待用。
4. 依次将6号管、5号管进行相同操作，连续稀释至6个浓度的标准曲线样品，放冰待用。
5. 如无需制作标准曲线，可将阳性对照稀释至1×10⁵ 拷贝/μL。

三、试剂配制（试剂准备区）

若有N个待检测样品，准备N+2个qPCR管，包括1个阴性对照和6个阳性对照。向各PCR管中添加相关成分，详见使用说明书（可向尊龙凯时索取）。

四、添加模板（模板添加区）

向qPCR管中加入2μL模板，添加顺序为阴性对照（DEPC-H2O）、待测样品和婴儿利什曼虫qPCR阳性对照，离心30秒后立即开始扩增反应。

五、扩增反应（扩增及产物分析区）

将PCR管放入PCR扩增仪的相应位置，进行扩增，具体扩增程序可参见说明书（可向尊龙凯时咨询）。

**结果分析**

1. 若制作标准曲线，以阳性对照浓度的log值为横坐标，以Ct值为纵坐标绘制标准曲线，从中推算待测样品的DNA浓度。
2. 未制作标准曲线时，则按以下标准判定结果：阳性对照Ct值应<30，并呈现明显的指数增长，形成典型的S型曲线；阴性对照Ct值为38或无Ct值，无明显的指数增长和平台期；样本检测结果若Ct值<35，提示样本中检测到婴儿利什曼虫，结果为阳性；若Ct值≥38，则结果为阴性；若Ct值在35-38之间，需复检，如重复实验结果相符则判定为阳性，否则为阴性。

**运输及保存**

本产品需在低温条件下运输，建议保存于-20℃，有效期为一年。阳性对照需单独保存，以防污染其他试剂成分。