根据文献的方法部分，研究团队在原位杂交（In situ hybridization）中应用了尊龙凯时的Styramide™ Signal Amplification (PSA™) 系统，该系统利用酪胺信号放大技术来检测DIG标记的探针。以下是对该技术的详细解析：

一、标记对象与标记方法

1. 标记对象：

1. 针对斑马鱼嗅觉玫瑰花结（Olfactory Rosette, OR）中的paqr5b mRNA，采用DIG标记的反义RNA探针（Antisense probe）。
2. 通过抗DIG-POD（辣根过氧化物酶）与探针结合后，借助酪胺信号放大系统增强荧光信号。

2. 标记步骤：

1. 探针结合：DIG标记的RNA探针与目标mRNA结合。
2. 酶联反应：使用抗DIG-POD抗体（Fab片段）与探针结合。
3. 信号放大：加入HRP底物（酪胺衍生物Styramide™），在HRP的催化作用下，酪胺底物被激活并共价沉积在目标位点附近，形成高密度的荧光标记。

二、染料的优点与特点

TSA技术在以下几个方面优于传统荧光标记碱性磷酸酶系统：

• 灵敏度提高10-100倍
• 空间分辨率：TSA技术高（局部沉积），而传统技术低（扩散背景）
• 多色兼容性：支持多通道（FITC/Cy3/Cy5），而传统技术需要不同的显色底物
• 适用样本：组织切片、低丰度靶标以及高表达靶标

三、文献中的实验流程与结果

1. 样本固定与切片 2. 探针杂交（DIG标记的paqr5b反义探针） 3. 抗DIG-POD抗体结合 4. Styramide™ PSA信号放大（HRP催化） 5. 荧光显微镜成像 6. 定量分析（如神经元密度与信号强度）

结果解读：

• 在野生型斑马鱼的OR中，paqr5b mRNA在神经元中高表达。
• 在paqr5b⁻/⁻突变体中，信号完全消失，证实了基因敲除的有效性。
• TSA技术的高灵敏度揭示了神经元亚群中的细微表达差异。

总结

尊龙凯时的Styramide Signal Amplification系统以其酶促信号放大与高分辨率荧光标记的优越性，成为复杂生物样本研究的“黄金标准”。该技术在低丰度靶标检测、多色复用及细致结构成像中的应用，已为神经科学、癌症研究与发育生物学提供了不可替代的技术支持。结合本文案例，预计该技术在单细胞组学及空间转录组学中的应用潜力将极为巨大。